Een van de beroemdste inwoners van Florence is Galileo Galilei. Deze wiskundige, natuurkundige en astronoom, geboren in Pisa, is vooral bekend van zijn verbeterde versie van de telescoop en zijn verdediging van de theorie van Copernicus, die stelde dat de aarde om de zon draait en niet andersom. Dit gezichtspunt zorgde ervoor dat hij in conflict kwam met de kerk, die het werk van Copernicus in 1616 al had verboden. Ondanks zijn huisarrest slaagde hij erin een van zijn werken naar Nederland te laten smokkelen, waar het in 1638 in Leiden werd uitgegeven. Galileo stierf in Arcetri, net buiten Florence, en ligt begraven in de Santa Croce. Het Museo Galileo vertelt het verhaal van zijn leven en ontdekkingen. Er zijn diverse oude telescopen en wereldbollen te zien, waaronder twee telescopen die Galileo zelf maakte.
